分光光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源，通過(guò)系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源，光線透過(guò)測(cè)試的樣品后，部分光線被吸收，計(jì)算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。測(cè)量范圍一般包括波長(zhǎng)范圍為380~780 nm的可見(jiàn)光區(qū)和波長(zhǎng)范圍為200～380 nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其*的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。那么使用分光光度計(jì)過(guò)程中要注意哪些問(wèn)題呢? 分光光度計(jì)的使用要點(diǎn)：
1.堅(jiān)持標(biāo)準(zhǔn)溶液現(xiàn)用現(xiàn)配，不使用過(guò)期標(biāo)準(zhǔn)液。使用儀器之前，一般要校正儀器，看看空白時(shí)透光率是否是100%。
2.比色皿應(yīng)該保持清潔，干燥。如有污物，可用稀鹽酸清洗后，再用1：1的酒精與乙醚清洗涼干。禁止用硬物碰或擦透明表面。或者建議使用10%的鹽酸溶液浸泡，然后用無(wú)水乙醇沖洗2~3次。比色皿具有方向性，使用時(shí)要注意，仔細(xì)觀察比色皿上方應(yīng)該有一個(gè)箭頭標(biāo)志的，代表入射光方向。注入和倒出溶液時(shí)，應(yīng)該選擇非透光面。好使用配對(duì)的比色皿。
3.防止儀器振動(dòng)，影響光學(xué)系統(tǒng)。
4.在開(kāi)機(jī)狀態(tài)，不測(cè)量時(shí)，應(yīng)該打開(kāi)樣品池門，否則，影響光電傳感器壽命。
5.樣品集中測(cè)量，避免開(kāi)機(jī)次數(shù)，可延長(zhǎng)光源壽命。
6.儀器工作穩(wěn)定性差，漂移大時(shí)，應(yīng)該考慮更換光源或光電元件。
7.一般分光儀主要有光源部分、光路部分、檢測(cè)器三的部分，光路有的情況是穩(wěn)壓電源問(wèn)題，鎢燈問(wèn)題及鎢燈位置與光路不一致等問(wèn)題。光路部分主要有比色皿不干凈，燈光與比色皿位置不合適(在正常情況下，比色皿位置放一張白紙，可以清楚看到光斑形狀呈顯矩形，屬于正常情況。對(duì)于檢測(cè)器大多數(shù)是正常的，但是光敏管或者光電管有時(shí)侯也會(huì)出現(xiàn)問(wèn)題。
8.若峰出現(xiàn)很多“毛刺”，可能是掃描速度過(guò)快，濃度過(guò)高或者狹縫過(guò)小;
9.紫外分光光度計(jì)用來(lái)測(cè)紫外光時(shí)，石英皿用來(lái)調(diào)零時(shí)不穩(wěn)定，是由那些原因?首先確定是否用成玻璃比色皿，判斷方法在紫外區(qū)任一波長(zhǎng)下用空氣調(diào)零測(cè)比色皿的吸光度如果超過(guò)1ABS則比色皿用錯(cuò)。再次用空氣調(diào)零看零點(diǎn)是否穩(wěn)定，如不穩(wěn)則是儀器問(wèn)題，如空氣穩(wěn)定而放入石英皿后不穩(wěn)定，則檢查是否空白溶液吸光度太高，是否空白溶液藥品過(guò)期，或者空白溶液透明范圍不適合此波長(zhǎng)測(cè)量比如甲醇在210NM以下吸光度很大無(wú)法調(diào)零。
10.儀器狹縫寬度的選擇狹縫的寬度會(huì)直接影響到測(cè)定的靈敏度和校準(zhǔn)曲線的線性范圍。狹縫寬度過(guò)大時(shí)，入射光的單色光降低，校準(zhǔn)曲線偏離比耳定律，靈敏度降低;狹縫寬度過(guò)窄時(shí)，光強(qiáng)變?nèi)酰瑒?shì)必要提高儀器的增益，隨之而來(lái)的是儀器噪聲增大，于測(cè)量不利。選擇狹縫寬度的方法是：測(cè)量吸光度隨狹縫寬度的變化。狹縫的寬度在一個(gè)范圍內(nèi)，吸光度是不變的，當(dāng)狹縫寬度大到某一程度時(shí)，吸光度開(kāi)始減小。因此，在不減小吸光度時(shí)的大狹縫寬度，即是所欲選取的合適的狹縫寬度。
11.紫外測(cè)量吸光度值不準(zhǔn)
(1).儀器調(diào)零后跳動(dòng)大的話那可能是儀器有問(wèn)題。
(2).調(diào)零穩(wěn)定的話，看樣品濃度是否過(guò)高，好控制在0-1個(gè)吸光度之間。
(3).濃度合適的話，看是否比色皿沒(méi)擦干凈，一般可用蒸餾水沖洗一下，擦干后用鏡頭紙擦干凈。
(4).檢查樣品是否穩(wěn)定，如果零點(diǎn)不變而放上樣品變化，那么是樣品有變化，檢查樣品是否有問(wèn)題。
12.關(guān)于儀器維護(hù)：
(1).儀器工作電源一般為220V，允許10%的電壓波動(dòng)。
(2).為了延長(zhǎng)光源使用壽命，在不使時(shí)不要開(kāi)光源燈。
(3).單色器是儀器的核心部分，裝在密封盒內(nèi)不能拆開(kāi)，為防止色散元件受潮發(fā)霉，必須經(jīng)常更換蛋色器盒干燥劑。
(4).必須正確使用吸收池，保護(hù)吸收池光學(xué)面。
(5).光電轉(zhuǎn)換元件不能長(zhǎng)時(shí)間暴光，應(yīng)避免強(qiáng)光照射或受潮積塵。
關(guān)注公眾號(hào)